0
0
0 از 0 رأی

۲۵,۰۰۰ تومان

پیش نمایش
تعداد دانشجویان: 23 نفر

درصد پیشرفت دوره

100% تکمیل شده

محیط های افتراقی

دسته: , منتشر شده در 1400/08/21 0 نظر به روز شده در 1401/01/21
محیط های افتراقی

انواع محیط های کشت افتراقی

سلام امیدواریم که حالتون خوب باشه.

همونطور که خودتون هم میدونید یکی از بخش های مهم هر آزمایشگاه، بخش میکروب شناسی اون هستش.

که یکی از لزومات این بخش، محیط های کشته که با استفاده از اون ها به بررسی وجود یا عدم وجود و یا انواع مختلف باکتری ها، قارچ ها و… میپردازند.

پس باید با انواع این محیط ها اشنایی داشته باشیم تا در صورت لزوم بتونیم ازشون به خوبی استفاده کنیم.

محیط کشت چیه؟

محیط کشت (Growth medium) ) : یک محیط دارای مایع یا ژل با هدف رشد دادن سلول ها ، میکروب ها و حتی برخی گیاهان کوچک میباشد.

آموزش محیط های افتراقی

انواع محیط کشت از نظر حالت فیزیکی

  1. محیط کشت مایع :
  • محیطی فاقد آگار
  • استفاده داخل لوله آزمایش
  • مانند محیط کشت Nutrient Broth
  1. محیط کشت جامد :
  • محیط حاوی آگار
  • منعقد شدن بعد از سرد شدن
  • استفاده درون لوله ازمایش یا پلیت
  • مانند محیط کشت TSI
  1. محیط کشت نیمه جامد :
  • دارای مقدار کمی اگار در ترکیب خود
  • به طور کامل منعقد نمیشوند
  • به حالت نیمه جامد باقی میمانند.
  • مانند محیط کشت SIM

انواع محیط کشت از نظر مواد تشکیل دهنده و کاربرد

  • محیط کشت پایه :
  • دارای کمترین مواد غذایی برای رشد باکتری ها
  • مبنای تهیه انواع محیط های کشت
  • مثال : نوترینت اگار و اب پپتون
  • محیط کشت مغذی :
  • استفاده به منظور رشد باکتری ها
  • دارای موادی مانند اب ، نمک، گلوکز، اسیدهای امینه و…
  • محیط کشت انتخابی :
  • دارای مهارکننده رشد
  • مهار رشد باکتری های ناخواسته و رشد یک باکتری خاص
  • مانند مک کانکی اگار

آموزش محیط های افتراقی

  • محیط کشت افتراقی :
  • وجود شاخص تشخیصی در این محیط ها
  • رشد نوع خاصی از باکتری در محیط باعث تغییر در شاخص
  • بلاد اگار و مک کانکی اگار
  • محیط کشت ترانسفر یا ترابر:
  • جهت نگهداری از جاندار نمونه
  • به منظور جابجایی یا ذخیره آن
  • جلوگیری ااز رشد جاندار نمونه و دیگر جانداران جلوگیری
  • محیط کشت غنی کننده :
  • غنی کردن محیط با افزودن خون ، سرم، یا تخم مرغ جهت افزایش تعداد کم باکتری /
  • بلادآگار و لون اشتاین جانسون

محیط کشت بلاد آگار

میشه گفت اگه این محیط نباشه کارمون لنگه!!

پس بریم باهم بشناسیمش 😊

ترکیبات: پپتون، کازئین، عصاره گوشت گاو، سدیم کلرید، خون

نوع محیط: انتخابی: افتراقی-غنی کننده

هدف :  تکثیر و جدا سازی باکتری های بیماریزا / بررسی وجود همولیز در باکتری ها

انواع همولیز در این محیط به صورت زیر هستش:

  • ۱- همولیز کاملبتا: باکتری دارای انزیم  همولیزین بوده و ایجاد منطقه شفاف اطراف ان
  • ۲- همولیز ناقص الفا: باکتری دارای انزیم  همولیزین بوده ولی نسبت لیز کمتر از ۵۰ درصد می باشد و اطراف ان هاله سبز رنگ ایجاد میشه.
  • ۳- عدم همولیز گاما : باکتری فاقد انزیم همولیزینه!

آموزش محیط های افتراقی

شکلات آگار

(میخوره محیط خوشگل و خوشمزه ای باشه هااا!! )

  • ترکیبات: پپتون، کازئین، عصاره گوشت گاو، سدیم کلرید، خون
  • نوع محیط: افتراقی-غنی کننده
  • نوع باکتری ها: سخت رشد ها (مثل هموفیلوس و نایسریا)

حالا اگه نمیدونی چطور این محیط درست میشه، این دوخط پایینو حتما بخون !

  • اگر به محیط پایهاگار خوندار، هنگامی که درجه حرارت اون بعد از اتوکلاو حدود ۸۰-۷۰ درجه سانتیگراد باش، خون دفیبرینه گاو اضافه کنیم، محیط کشت اگار شکلاته بدست میاد.

آموزش محیط های افتراقی

EMB agar (Eosin methylene blue)

  • ترکیبات: پپتون، لاکتوز، ائوزین، متیلن بلو
  • نوع محیط: افتراقی
  • آگار ائوزین متیلن بلو (EMB ) یک محیط کشت انتخابی و افتراقی است.

این یک محیط کشت انتخابی برای باکتری های گرم منفی است .

(باکتری های گرم مثبت توانایی رشد بر روی این محیط را ندارند.)

  • محیط EMB، در تمایز چشمی اشریشیا کلی، سایر باکتری های میله ای گرم منفی روده غیرپاتوژن روده ای که تخمیر کننده ی لاکتوز هستند و دو جنس سالمونلا و شیگلا هم کمک کننده است.
  • تمایز بین این باسیل های گرم منفی بر اساس رنگ کلنی اون ها است که بر روی محیط قابل مشاهده است.
  1. کلنی های رنگی بر روی EMB آگار: تخمیر کننده لاکتوز
  2. کلنی های بی رنگ بر روی EMB آگار: عدم توانایی تخمیر کردن لاکتوز

آموزش محیط های افتراقی

محیط مکانکی آگار

  • ترکیبات: پپتون، لاکتوز، کریستال ویوله، نمک های صفراوی، نوترال رد
  • نوع محیط: افتراقی
  • نوع باکتری ها: برای جداسازی و تعیین هویت باکتری های گرم منفی
  • املاح صفراوی و کریستال ویوله مانع از رشد باکتری های گرم مثبت میشن.
  • باکتری های تخمیر کننده ی لاکتوز (لاکتوز مثبت ها)،کلنی هایی به رنگ ارغوانی و باکتری هایی که قادر به تخمیر نیستند (لاکتوز منفی ها) کلنی های بی رنگ ایجاد می کنند.

آموزش محیط های افتراقی

  (Sulfide-Indol-Motility) SIM

  • با استفاده از این محیط سه خصوصیت مختلف باکتری، تولید ایندول و گاز SH2 و حرکت را می تونیم بسنجیم. .
  • و در تمامباکتری ها هم می توان بکار برد.
  • به روش Stab تا یک سانتی متری انتهای لوله به وسیله آنس نوک تیز در این محیط کشت می دهیم.
  • ایجاد هیدروژن سولفوره توسط باکتری به صورت سیاه شدن محیط، خودش را نشان میده.
  • در صورت متحرک بودن باکتری کشت شده، سیاهی توی تمام محیطی که باکتری پخش میشه ، انتشار پیدا میکنه.
  • برای بررسی اندول هم از معرف کواکس یا ارلیش ( پارا دی متیل آمینو بنزآلدهید) استفاده میشه.

در اثر واکنش ایندول با عامل آلدهیدی ، تولید رنگ قرمز میکند.

آموزش محیط های افتراقی

 سیمون سیترات آگار(  Simmons Citrate)

  • هدف : برای تعیین قدرت باکتری در استفاده از سیترات به عنوان تنها عامل کربندار موجود در محیط
  • باکتری هایی که قادر به رشد در این محیط باشند در حقیقت تونسته اند از سیترات که تنها عامل کربن دار در محیط است استفاده کنند .
  • در نتیجه در مجاورت معرف رنگی بروموتیمول بلو به رنگ آبی در می آیند.
  • در غیر این صورت به علت عدم رشد باکتری و عدم تغییر رنگ محیط آزمایش سیترات منفی است.

آموزش محیط های افتراقی

مانیتول سالت آگار

  • ترکیبات: پپتون، مانیتول، سدیم کلرید، فنل رد
  • نوع محیط: انتخابی-افتراقی
  • نوع باکتری ها: استافیلوکوکوس ها
  • محیط کشت مانیتول سالت آگار حاوی غلظت بالایی از نمک است ( بالااااااهااا )
  • که مناسب برای تشخیص باکتری هاییه که توی محیط هایی با غلظت زیاد نمک، زندگی می کنند.

اگه گفتی مثه کدوم باکتری؟!

بعلهههه اورئوس همیشگی !

باکتری استافیلوکوکوس اورئوس می تونه توی غلظت های بالای نمک زنده بمونه و این محیط کشت بسیار مناسب برای تشخیص این نوع باکتری است.

مانیتول هم نیک نوع قنده که اگر باکتری بتونه اون رو تخمیر کند pH پایین آمده و محیط اسیدی شده و شناساگر فنل رد به رنگ زرد ظاهر می شه.

آموزش محیط های افتراقی

محیط کشت TSI

  • محیط کشت TSI از محیط های مورد استفاده برای نشان دادن توانایی تخمیر لاکتوز در خانواده انتروباکتریاسه هست.
  • که دارای قندهای گلوکز، لاکتوز، ساکارز، معرف فنل رد (که در شرایط اسیدی زرد و در شرایط قلیایی قرمز می باشد) و فروس سولفات می باشد.
  • محیط KIA هم مثه محیط TSI هستش، به استثنای این که قند ساکارز نداره.
  • در این دو محیط تخمیر قندهای گلوکز، لاکتوز و ایجاد گاز H2S و CO2 بررسی می شوند.
  • برای کشت روی اون کافیه که نیدل را آلوده به باکتری کنیم . مستقیم تا ۴ میلی متر به داخل محیط فرو برده و از همان جهت خارج کنیم.
  • و سپس در سطح شیبدار به صورت زیگزاگ کشت بدیم وتوی انکوباتور ۳۷ °C به مدت ۲۴ ساعت انکوبه کنیم.

آموزش محیط های افتراقی

 

گزارش TSI

  • تولید SH2  : باکتری با آزاد کردن سولفید از تیوسولفات سدیم در محیط اسیدی ، آن را با فریک موجود در سیترات آمونیوم فریک واکنش داده و FeS تولید میکند که این ترکیب محیط را سیاه میکند.
  • تولید CO2: محیط از ته لوله فاصله گرفته و یا داخل محیط ترک خورده و یا حباب میدهد.
  • تخمیر قند ها: گلوکز در تمام محیط کشت تخمیر شده و ایجاد اسید میکند اما چون غلظت پروتئین بیشتر از گلوکز بوده و در سطح در تماس با هوا است پروتئین اکسید شده و قلیا تولید میکند که میتواند اسید حاصل از گلوکز را خنثی کند و قرمز شود.(Alk) ، لاکتوز به مقدار زیادی اسید تولید میکند که میتواند قلیا را خنثی کند و تولید رنگ زرد کند. (A)
  • باکتری هایی که گلوکز را تخمیر میکنند : Alk / A
  • باکتری هایی که لاکتوز را تخمیر میکنند : A /A
  • باکتری هایی که هیچکدام از ۲ قند را تخمیر نمیکنند : Alk / Alk

SS (Salmonella-Shigella) agar

  • سدیم سیترات، نوترال رد
  • نوع محیط: انتخابی-افتراقی
  • نوع باکتری ها: تشخیص سالمونلا و شیگلا
  • این محیط حاوی تیو سولفات سدیم بعنوان منبع گوگرد و آهن فریک به عنوان منبع آهن هستش.
  • همچنین حاوی لاکتوز و معرف نوترال رد می باشد.
  • اگر باکتری تیوسولفات محیط را احیا کند،H2Sتولید نموده که H2S با آهن موجود در محیط تولید پرگنه های سیاه رنگ می نماید.

آموزش محیط های افتراقی

XLD (xylose lysine deoxycholate) agar

  • ترکیبات: گزیلوز، لیزین، لاکتوز، ساکارز، نمک های صفراوی، فریک آمونیوم ، سیترات، فنل رد
  • نوع محیط: انتخابی-افتراقی
  • نوع باکتری ها:جداسازی گونه های سالمونلا و شیگلا
  • PHآن تقریباً ۷٫۴ است و به دلیل داشتن شاخص فنول رد، ظاهری صورتی یا قرمز روشن دارد.
  • تخمیر قند ها pH را کاهش می دهد و نشانگر فنول رد با تغییر به رنگ زرد این تغییر را نشان میدهد.
  • بیشتر باکتری های روده، از جمله سالمونلا، می توانند قند زایلوز را تخمیر کرده و اسید تولید کنند.
  • کلنی های شیگلا نمی توانند این کار را انجام دهند و بنابراین قرمز باقی می مانند.
  • گونه های سالمونلا: کلنی های قرمز، بعضی از آن ها دارای مراکز سیاه هستند. آگار به دلیل وجود کلنی های سالمونلا قرمز خواهد شد.
  • گونه های شیگلا: کلنی های قرمز.
  • کلی فرم ها: کلنی های زرد تا نارنجی.
  • سودوموناس آئروژینوزا: کلنی های صورتی.

سلنیت F

  • ترکیبات: پپتون براث، سدیم سلنیت
  • نوع محیط: غنی کننده
  • نوع باکتری ها: سالمونلا
  • محیط سلنیت Fاز محیط های غنی کننده – انتخابی است.
  • محیط زرد کم رنگ بوده و نیاز به اتوکلاو ندارد.
  • محیطی مغذی برای جدا سازی گونه های سالمونلاهاست .که یک محیط غنی کننده Enrichmentنیز  هستش که حاوی سلنیت سدیم است که یک نمک صفراوی است و مانع از رشد باکتری های گرم مثبت و بسیاری از باکتری های گرم منفی میشه.

آموزش محیط های افتراقی

محیط مولرهینتون اگار

کاربرد اصلی  محیط مولر هینتون آگار جهت تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی باکتری ها (آنتی بیوگرام) به روش دیسک می باشد.

ممنون ازینکه تا اینجا همراه مدلبس بودی😊

امیدواریم که مطالب واست مفید بوده باشه .

اشتراک گذاری:

نظرات

دیدگاهها

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “محیط های افتراقی”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

برچسب‌ها: