0
0
0 از 0 رأی

۱۰,۰۰۰ تومان

پیش نمایش
تعداد دانشجویان: 9 نفر

درصد پیشرفت دوره

100% تکمیل شده

تست آنتی بیوگرام

دسته: , منتشر شده در 1400/08/21 0 نظر به روز شده در 1401/01/21
تست آنتی بیوگرام

 

تست انتی بیوگرام

سلام امیدواریم که حالتون خوب باشه.

در این مطلب به توضیح تست آنتی بیوگرام و روش انجام اون میپردازیم.

امیدواریم که مطلب براتون مفید واقع بشه.

پس بزن بریم!

آنتی بیوگرام چیه؟

شاید تا به حال براتون پیش اومده باشه، که به خاطر یه مشکلی ( مثلا عفونت ادراری ، باکتریایی و… ) به پزشک مراجعه کردین و پزشک براتون انتی بیوتیک تجویز کرده باشه!

حالا میدونین که چطور تشخیص میدن که این انتی بیوتیک برای این عفونت مناسبه یا نه ؟

این فرایند تشخیص ، طی تست آنتی بیوگرام انجام میشه و با انجام این تست میشه فهمید که مثلا آیا باکتری اشرشیاکلی به انتی بیوتیک ازیترومایسین جواب میده یا نه!

پس در کل برای اینکه ببینیم چه انتی بیوتیکی روی یک باکتری موثر هستش ، باید تست آنتی بیوگرام انجام بدیم.

چون هر دسته از آنتی بیوتیک ها روی یک گروه خاصی از باکتری اثر دارند و نمیشه برای همه باکتری ها یک نوع انتی بیوتیک تجویز کنیم.

نمونه های مورد استفاده چیه ؟

نمونه ها در بخش میکروب شناسی متنوع هستش. و میتونیم به نمونه های زیر اشاره کنیم :

  • ادرار
  • مدفوع
  • خون
  • خلط
  • زخم
  • خلط
  • CSF و…

تست انتی بیوگرام

اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﮐﺮدن آزﻣﺎﯾﺶ ﻫﺎی ﻣﯿﮑﺮوبی

برای جلوگیری از برز خطا در ازمایشگاه ، باید روش های ازمایش کاملا استاندارد باشند.

که دعایت موارد زیر ضروری هست:

  1. مقدار باکتری تلقیح شده
  2. نوع محیط کشت ( که در بیشتر موارد از محیط کشت مولرهینتون اگار استفاده میشه )
  3. شرایط محیط کشت از نظر PH و افزودنی ها مثل خون و سرم
  4. اتمسفر و دما و زمان انکوباسیون
  5. غلظت ماده ضد میکروبی

تست انتی بیوگرام

روش های مختلف تست انتی بیوگرام

برای سمجش حساسیت ماده ضد میکروبی روش های مختلفی وجود داره.

که در ازمایشگاه های بالینی ، سه روش زیر بیشتر استفاده میشه:

  1. انتشار از دیسک ( Disk Diffusion )
  2. رقت سازی سریال (Minimum Inhibitory Concentration: MIC )
  3. انتشار گرادیانت ( E-test)

در این مقاله ما به توضیح روش انتشار از دیسک میپردازیم .

روش انتشار از دیسک

این روش برای اولین بار توسط دانشمندانی به نام های  Kirby و  Bauer ارائه شد به همین خاطر نام دیگر این روش ، Kirby-Bauer میباشد.

تست انتی بیوگرام

مراحل انجام ازمایش

بعد از شناسایی کامل یا اولیه باکتری، باید یک سوسپانسیون از اون تهیه کرد.

برای این کار باید با استفاده از یک لوپ استریل حداقل ۴ کلونی مشابه نمونه برداشت و در یک لوله حاوی سرم فیزیولوژی منتقل کرد.

تعیین تقربی تعداد باکتری در سوسپانسیون

برای اینکه استفاده از تعداد زیاد یا کم باکتری باعث نتایج اشتباه میشه ، باید از تعداد مناسب باکتری استفاده کنیم.

برای این کار ، از روش کدورت سنجی استفاده میکنیم.و تعداد تقریبی باکتری رو در محلول سوسپانسیونمون مشخص میکنیم.

به این مرحله اصطلاحا استاندارد نمودن تعداد باکتری میگن.

برای این منظور در ازمایشگاه ها از محلول استاندارد نیمه مک فارلند استفاده میشه.

به این صورت که سوسپانسیون باکتری رو با مایع نیمه مک فارلند مقایشه میکنند و اگر از نظر کدورت مشابه هم باشند ، به این معنیه که در هر میلی لیتر از سوسپانسیون تعداد  ۱٫۵*۱۰ ۸ باکتری وجود داره. ( ۱٫۵*۱۰۸ CFU/ml )

تست انتی بیوگرام

کشت سوسپانسون روی محیط کشت مناسب

برای انجام تست انتی بیوگرام معمولا از محیط مولر هینتون اگار استفاده میکنند.

برای باکتری های پر نیاز میشه مواد افزودنی مثل خون و… به این محیط اضافه کرد.

در مدت ۱۵ دقیقه از زمان تنظیم کدورت ، باید کشت انجام بشه.

برای این کار سواب استریل شده رو داخل لوله دارای سوسپانسیون کزده و چند بار میچرخانیم و مایع اضافی اون رو گرفته و و بعد روی سطح محیط مولر هینتون کشت میدیم.

و در مجموع ۳ بار با چرخاندن پلیت هربار به میزان ۶۰ درجه ، کشت رو تکرار میکنیم.

تا از کشت یکنواخت روی سطح محیط کشت خیالمون راحت بشه.

و در اخر هم با سواب ناحیه خارجی اگار روهم کشت میدیم.

تست انتی بیوگرام

دیسک گذاری

حداکثر تا ۱۵ دقیقه بعد از تلقیح ، باید دیسک های انتی بیوتیکی رو روی محیط قرار داد.

غلظت و نام هر انتی بیوتیک به صورت اختصاری روی هر دیسک نوشته شده.

بعد از کشت دادن باکتری ، دیسک های انتخاب شده در شرایط استریل و با استفاده از پنس ، کاملا روی سطح اگار قرار داده میشه.

حواستون باشه که :

  • دیسک فقط یکبار باید با سطح اگار تماس پیدا کنه.
  • و از گذاشتن و برداشتن اونها باید خودداری کنید.
  • بعد از پذاشتن دیسک ها ، اونها رو با کمی فشار فیکس کیند تا با برعکس کردن پلیت از اگار جدا نشن.
  • و فاصله هر دیسک هم نباید کمتر از ۱۵ میلی متر باشه.
  • دیسک ها از یواره پلیت هم باید ۱۲ میلی متر فاصله داشته باشند.

تست انتی بیوگرام

انکوباسیون

بعداز دیسک گذاری ، پلیت را نام گذاری کرده و اون رو داخل انکوباتور قرار میدیم.

که برای بیشتر ارگانیسم ها دمای ۳۵ درجه سانتی گراد و زمان ۱۸ ساعت انجام میشه.

البته موارد استثنا هم وجود داره که باید بر اساس قواعد استاندارد CLIS انکوبه بشن.

تفسیر نتایج

قبل از خوندن نتیجه تست ، باید دقت کنیم که باکتری ها از نظر رشد خالص و هم گون باشند

و کلنی های ایجاد شده هم یک شکل باشند.

اگه هاله های عدم رشد درهم و نامشخص باشه ، باید ازمایش رو تکرار کنیم.

اما اگه هاله های عدم رشد خالص و به قولی اوکی بود ، میریم که قطر هاله ها رو اندازه گیری کنیم.

اندازه گیری قطر هاله عدم رشد ، بدون بازکردن درب پلیت و از پشت پلیت با استفاده از خط کش یا کولیس انجام میشه و به میلی متر ثبت میشه.

و بعد با استفاده از جداول استانداری که توسط  CLSI تهیه شده و قطر هاله ها ، انتی بیوتیک های استفاده شده رو در سه دسته مقاوم ، نیمه حساس و حساس قرار میدیم.

 

اشتراک گذاری:

نظرات

دیدگاهها

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “تست آنتی بیوگرام”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

برچسب‌ها: